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電鏡固定液的使用說明和保存條件
更新時間:2022-11-10   點(diǎn)擊次數(shù):5977次
   電鏡固定液(2.5%,電鏡專用)由戊二醛、磷酸鹽、去離子水等組成,pH7.2~7.4,該固定液對細(xì)胞核、細(xì)胞漿的細(xì)微結(jié)構(gòu)固定效果好,經(jīng)常用于電鏡標(biāo)本的固定。
  使用說明:
  組織:組織取材后一分鐘內(nèi)必須進(jìn)入戊二醛,取材部位一定要準(zhǔn)確,大小盡量控制1個立方毫米以內(nèi)或更小。取完材后放4℃固定4小時以上.送檢。運(yùn)輸2-8℃保存。
  貼壁細(xì)胞:培養(yǎng)好的細(xì)胞倒掉培養(yǎng)基迅速加入預(yù)冷的電鏡固定液,細(xì)胞刮快速刮下細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)(勿用胰酶),轉(zhuǎn)速500-800rpm離心5min(成團(tuán)細(xì)胞大小為綠豆大小為宜),成團(tuán),隨后去除大部分上清液(留1ml左右),轉(zhuǎn)至1.5離心管中,靜止自然沉降1h(2-8℃),去上清,再加入1ml新鮮電鏡固定液放2-8℃固定保存。
  懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)離心,轉(zhuǎn)速800-1000rpm,離心5min成團(tuán)(成團(tuán)細(xì)胞大小為綠豆大小為宜),隨后去除大部分上清(留1ml),轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中,靜止自然沉降1h(2-8℃),去上清,再加入1ml新鮮電鏡固定液放2-8℃固定保存。
  電鏡固定液保存條件:
  4°C保存,一年有效操作說明將取出的組織切成1mm3大小,然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中在4°C條件下固定2-4h。如果組織帶有較多的血液和組織液,應(yīng)先用固定液洗幾遍,然后再切成小塊固定。如不能一次性切成1mm3的大小也可以先切成稍微大點(diǎn)的組織塊,然后邊固定邊修成1mm3大小的。
  注意事項:
  1.戊二醛滲透性較差,所以取材要控制在1個立方毫米左右。
  2.取完材后盡快放入電鏡固定液中。
  3.加入固定液的組織放2-8℃固定保存。
  保存條件:2-8℃避光保存,1年有效。
  以上知識僅供參考,希望以上知識對您有所幫助哦!
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