ELISA檢測可謂是免疫學(xué)反響應(yīng)用到科研出產(chǎn)中更為廣泛更為靈敏的技術(shù)手段。但是在新老手操作過程中老是會泛起或大或小的題目，比如說花板，假陽性，全顯色，悉數(shù)顯色，顯色比空缺還低。研域生物研究人員一直在尋求讓ELISA試劑盒實(shí)，ELISA體系更安穩(wěn)的辦法。讓我們的客戶實(shí)驗(yàn)愈加便利，削減更多操作中遇到的困擾。
ELISA檢測具體的實(shí)驗(yàn)還要有鞏固的理論外也要實(shí)踐，看一下ELISA可不能夠應(yīng)用到自己實(shí)驗(yàn)當(dāng)中去。但ELISA選用什么，要依據(jù)實(shí)驗(yàn)具體來實(shí)踐。應(yīng)留心以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。小分子必需依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事前對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí)，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。ELISA檢測常用的包被液除了方才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
ELISA檢測中要注意的各個(gè)細(xì)節(jié)：
1.血清：使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后 ，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
